生化测定外包：成事在天，谋事在人，事在人为

发布日期：2022-12-14 09:42 浏览次数： 作者：admin

提要：要用好生化测定外包，轻松、及时拿到可靠、真实、可用的生化测定数据，课题组必须：（1）成事在天，了解并遵循生化测定的基本规律；（2）谋事在人，根据自身情况，选择合适的测定方式和靠谱的外包公司；（3）事在人为，尽到自身应尽的责任。
       生化测定的目标：轻松、及时拿到可靠、真实、可靠的生化测定数据，据此发表更多、更高水平的研究论文，从而课题组老师优质结题并成功申请到新课题，研究生顺利毕业并成功找到满意的工作。
       生化测定外包：公司提供高质量的试剂盒或者代测服务，及时、有效、全面的技术支持，科学、合理的建议，从而显著降低生化测定的难度、工作量和成本，帮助课题组实现生化测定的目标。
       据大数据平台“知了窝”统计：截止到2022年9月，我司生化测定外包用户已经发表SCI论文1612篇，总影响因子7173分，单篇最高影响因子38分。上述数据表明，我司已经帮助很多课题组实现了生化测定的目标。编写此文，与大家分享我司生化测定外包的经验和思考，希望能够对更多课题组有所帮助。
 
1 成事在天：生化测定的基本规律
 
       成事在天的“天”不是指虚幻莫测的天意，而是指事物本身的基本规律。无论谁来做这件事，要想成事，都必须了解并遵循该事物的基本规律。因此，要想做好生化测定，我们就必须先了解其基本规律。
1.1 生化测定
       基因和环境及其相互作用通过代谢共同决定了生物性状。
       生命科学研究：（1）发现并确认产生某种性状的条件，（2）测定并比较处理组与对照组某个代谢的差异，明确产生该性状的代谢机制，（3）通过分子生物学和细胞生物学等技术，研究该代谢的调控机制，（4）研发有效调控该代谢的措施，（5）按照需要，人为促进或者阻止该性状的产生。
       生化测定：通过测定样本中某个代谢的系列指标，比较处理组和对照组这些指标的差异，明确某种性状与该代谢的关系。因此，生化测定是生命科学研究的基本手段。
1.2 生化测定的目标
       依次是：（1）测定效果好，即可靠、真实、可用的测定数据，这是得出明确、可靠的研究结论，并发表研究论文的基础；（2）测定效率高，即及时完成测定，这是发表更多、更高水平研究论文的关键；（3）测定成本低，即尽可能降低测定费用，至少降低到课题经费能够承受的范围内，这是顺利完成测定的前提。
1.3 做好生化测定需要具备的因素
1.3.1 合理的测定指标
       依次是：（1）不漏测，即选择某个代谢已知的全部可测定指标，以免因为漏测了某种指标，而无法得出明确、可靠的研究结论；（2）不少测，即能够支撑起至少1篇SCI论文所需的测定指标种类，以免无法发表高水平的研究论文，一般5种指标左右，包括关键物质含量及其催化酶类；（3）不多测，即不测定其它代谢的指标，以免在撰写论文时用不上，造成浪费。
1.3.2 合适的测定方法
       依次是（1）测定方法的专一性、重复性和简便性，不专一则测定数据无意义，重复性差则测定数据不可用，测定操作烦难则测定易失败；（2）测定方法所需的用品齐备，包括仪器设备、试剂和耗材，缺乏任何一种，测定都不能进行；（3）测定方法适合所测定的样本，生物样本千变万化，是否含有该测定指标，该测定指标的变化范围，是否存在类似物或者抑制物，都是未知的，只有经过预测定，才能判断该测定方法是否适合所测定的样本。
1.3.3 质可靠、数合理、量充足的样本
       质可靠：（1）样本的遗传背景清楚无误，（2）取样具备典型性、代表性和重复性，（3）在取样时，在样本运输和保存过程中，样本中拟测定的指标未发生显著变化。质可靠的样本是测定数据可靠的基础，即测定数据可靠地反映了该性状与某个代谢之间的关系。
       数合理：（1）处理组合数，即对照组和处理组的总组数，一般设置对照组和处理组各一；（2）取样间隔，即取样时间点，一般设置5个取样时间点；（3）重复样本数，一般设置3个重复样本。数合理的样本既能反映代谢变化的过程，又能显著降低测定成本（时间和费用）。
       量充足：能取尽取，宁可备而不用，不可用而不备，确保每种样本的量保证完成全部测定的需要。样本的量取决于总测定次数：（1）测定指标种数，（2）测定方法，（3）测定重复次数，此外还与预测定、验证、重测、加测等有关。只有确定了测定指标种数和测定方法后，才能预估所需样本的量。
1.3.3.1 预实验
       依次是：（1）核对遗传背景，包括物种/品种/品系，或者细胞株/细胞系，或者转基因/基因敲除/基因沉默情况；（2）观察对照组生长发育情况，包括是否具备与遗传背景相应的性状和整齐度；（3）设计多种处理方式，观察处理组生长发育情况，尤其是与对照组相比，处理组中所研究性状的典型性、代表性和重复性；（4）记录从处理开始到典型性状出现的时间。
       做好预实验，可以确认：（1）遗传背景是否清楚无误，（2）兼具典型性、代表性和重复性的处理组，（3）从处理开始到出现典型性状所需时间。
1.3.3.2 正式实验
       按照预实验结果，进行正式实验：（1）设置处理组和对照组各一，最大限度地减少样本数；（2）设置合理的取样间隔，一般平均设置5个取样时间点；（3）按照典型性、代表性和重复性，取样；（4）能取尽取，取足量的样本。
1.3.3.3 防止样本变质
       鲜样依次是：（1）取样时液氮速冻，大体积样本先切割混匀再速冻；（2）运输时加足量干冰/冰袋，防止升温；（3）超低温冰箱管理，样本附双标签，在冰箱中有序放置以保证冷气流动，避免长时间停电，或者别人取出样本时误把你的样本一并取出并长时间放置在室温中。
       干样依次是：（1）自然风干，或者烘干；（2）采取措施，防止回潮，（3）室温保存即可。
       土样依次是：（1）自然风干，（2）室温保存。
1.3.4 测定
1.3.4.1 预测定
       首先，一种测定指标通常由多种测定方法。查阅文献/实验指导书中该指标常用的测定方法，最好是同类或者类似样本的近年来的文献报道，比较其专一性、重复性和简便性，选择其中1~2种测定方法。
       其次，核对实验室具备的仪器设备，选择能够落实测定用品的1种测定方法，并落实全部测定用品。
       最后，选择对照组第3取样时间点所取3个重复样本进行预测定。其中，任取一个重复样本，3次进行取样、称量、提取和测定，计算其变异系数，用来评估技术重复性；再取其余两个重复样本，各进行1次取样、称量、提取和测定，计算其变异系数，用来评估样本重复性。
       预测定异常包括：（1）测定不能顺利完成，（2）测定值非常接近于零，（3）测定值出现明显的负值，（4）技术重复性差，（5）样本重复性差。
       分析其可能原因并优化/调整：（1）样本的质不可靠，变质，取样重复性差，或者不含有该指标；（2）测定用品质量不可靠，仪器设备故障/不稳定，试剂纯度不够/变质，耗材用错/质量差；（3）测定方法不合适，不专一，重复性差，测定操作烦难；（4）测定人缺乏测定经验，测定操作不规范、不到位。
1.3.4.2 正式测定
       按照预实验确定的测定指标、测定方法、测定用品和测定操作，进行正式测定。
       注意：（1）合理安排每天的测定工作量，避免提取样本过多而不能当天完成测定，防止因为匆忙/疲劳导致测定失败或者测定结果重复性差；（2）当天的测定数据当天处理，以便及时发现异常数据，并进行验证和优化。
1.3.5 测定数据分析
      测定数据的可用性是指根据正式测定的数据，可以得出明确、可靠的研究结论，并发表研究论文，不留下“后遗症”。
      正式测定完成后，及时进行测定数据分析。利用合适的软件，如SPSS处理正式测定数据，并进行下述分析。
1.3.5.1 变异系数
      变异系数等于标准误除以平均值。变异系数过大会导致差异显著性的误判。
      标准误取决于：（1）样本的重复性，（2）测定的重复性，测定方法的重复性、测定用品的质量和测定操作的规范和到位，（3）重复测定的次数。适当增加测定的重复次数，可以显著降低标准误，从而降低变异系数。
1.3.5.2 差异显著性
       包括组内和组间差异显著性。其中，最重要的是组间差异显著性。
       组间差异显著性主要取决于取样的典型性，即处理组与对照组相比所研究的性状差异是否显著。
1.3.5.3 测定值严重偏离文献报道值
       判断是否严重偏离的依据：（1）达到数量级的差异，（2）比较测定值的单位，浓度、体积和时间的单位等是否一致；（3）注意分母是否一致，尤其是鲜重/干重。
1.3.5.4 变化是否有规律
       某个指标的测定值变化是否呈现明显的趋势。最头疼的是，多次剧烈波动，变化无规律。
       可能原因包括：（1）取样缺乏代表性，（2）测定操作不规范、不到位，（3）分母选择不当。
       分母选择的原则：（1）分母本身不发生显著变化，否则会显著改变分子的变化趋势，或者至少稳定上升/下降；（2）分母具备明确的生理意义。
       常用分母包括：（1）鲜重，适合于组织/器官样本，生理指标；（2）干重，适合于土壤/风干样本，营养指标；（3）百万细胞数，适合于单细胞样本，如细胞株/系。其它还有个体数、叶绿素含量和DNA含量等罕见的分母。
排除了取样缺乏代表性和测定操作不规范不到位后，可以尝试更换分母。
1.3.5.5 不同指标相互矛盾
       常见的是，酶活性的变化不能解释物质含量的变化。
       可能原因包括：（1）漏测了某种酶活性，（2）未统一各种合成酶或者降解酶的活性单位，当几种合成酶或者降解酶活性有升有降时，无法计算总合成酶活性或者总降解酶活性的高低，（3）代谢本身是立体和网状的，存在冗余/补偿效应。
1.3.5.6 不符合预期
       某些指标的实际测定值的大小和变化趋势不符合课题组的预期。
       可能原因包括：（1）选择的代谢途径与所研究的性状无关，（2）取样和测定问题，（3）代谢的冗余/补偿效应，（4）预期依据不足。
       在排除了（1）~（3）的可能性后，仔细斟酌预期的依据是否充分。毕竟预期只是预期，否则就不需要进行实际测定了。不能刻舟求剑，而是应该尝试能否合理解释测定结果，说不定是新发现呢。
1.4 测定费用
1.4.1 课题经费的可持续
       各种科研基金就在那儿，关键是课题组怎么才能在激烈的同行竞争中脱颖而出，成功申请到课题。此前结题质量和研究工作积累是申请课题的两个重要因素，核心就是上一个课题发表的论文数量和质量。
       用好现有课题经费，在课题周期内拿到尽可能多的可靠、真实、可用的测定数据，据此发表更多、更高的研究论文，从而优质结题，并成功申请到新课题，实现课题经费的可持续。
1.4.2 科学、合理地大幅度降低测定费用
       课题组通常至少1/2的时间和2/3的经费都花在测定上，包括样本准备、测定方法建立和测定本身。
       只有科学、合理地大幅度降低测定费用，课题组才能用有限的课题经费，尽可能多地拿到可靠、真实和可用的测定数据。
       科学、合理地大幅度降低测定费用的途径：（1）提高测定成功率，测定失败次数越多，测定总费用越高；（2）降低测定总次数，测定总次数越多，测定总费用越高。
       测定成功率取决于：（1）测定难度，（2）测定操作的规范、到位。
       测定总次数取决于：（1）测定指标的种数合理，（2）样本质可靠和数合理，（3）技术重复性。尤其是样本的数合理和技术重复性。
       做好预实验，在正式实验时就可以只设置2个处理组合（对照组和处理组各一），与4个处理组合（一个对照组和3个处理组）相比，样本数就减少1/2，相应地测定总费用就降低1/2。
       技术重复性取决于测定方法的重复性，测定用品质量，测定操作规范、到位。如果预测定的技术重复性好，在正式测定时就不需要同一个样本进行3次以上的重复测定，3个重复样本只需要各测定1次即可，测定次数减少2/3，相应地测定费用也减少2/3。
       在其它条件不变的情况下，通过减少处理组合数和提高技术重复性，就可以把测定费用降低到原来的1/6！
 
2 谋事在人：选择合适的测定方式和靠谱的公司
 
       谋事在人的“谋”是指在了解事物的基本规律的基础上，根据自己“要什么”和“有什么”，遵循基本规律，来谋划合适的做事方式和寻找靠谱的合作对象。
       就生化测定而言，课题组必须：（1）想清楚自己要的是“轻松、及时拿到可靠、真实、可用的测定数据”，自己有没有相应的测定用品，测定操作能否规范、到位，测定时间够不够，再根据自己的意愿，选择适合于自己的测定方式；（2）如果选择测定外包，还必须仔细甄别外包公司有没有“强大的专业能力、良好的诚信记录和巨大的失信代价”，从而慎重选择靠谱的公司进行合作。
2.1 合适的测定方式
2.1.1 现有测定方式
       生化测定方式有3种：（1）传统方式，即课题组独力完成全部测定工作；（2）试剂盒方式，即课题组购买试剂盒，在公司技术支持下完成预测定和正式测定；（3）代测方式，即课题组购买代测服务，由公司完成预测定和正式测定。其中，试剂盒方式和代测方式属于生化测定外包。
       传统方式的困境：为了保证测定效果，课题组老师花费大量的时间和经费，训练研究生的测定技能；等研究生具备一定测定经验时，很快就面临毕业，实际上做不了多少有效测定工作；只能从头重新花费大量的时间和经费，训练新研究生的测定技能；如此循环往复，课题组老师持续投入大量的时间和经费来训练研究生的测定技能，但是课题组的测定能力始终处于较低水平。
       与传统方式相比，采取试剂盒方式：（1）课题组不再需要自己建立合适的测定方法，（2）能够得到公司的技术支持，包括预测定和正式测定，（3）能够得到公司的科学、合理的建议，包括测定指标选择、样本准备和数据分析等，从而测定难度显著降低，测定工作量也显著减少，测定效果有保证，测定效率也显著提高。但是，由于课题组仍然要自己完成预测定和正式测定，试剂盒方式要求课题组具备：（1）测定所需的仪器设备，（2）自备试剂，即个别易燃、易爆的试剂，不允许快递运输，（3）规范、到位的测定操作。
       与试剂盒方式相比，采取代测方式：（1）课题组不再需要做预测定和正式测定，彻底从烦难的生化测定中解脱出来，（2）课题组不需要具备任何测定用品和规范、到位的测定操作，从而测定难度和测定工作量都降低到零，测定效果更有保证，测定效率最高。
       试剂盒方式和代测方式能够显著降低测定的难度和工作量，从而帮助课题组轻松、及时拿到可靠、真实、可用的生化测定数据。
2.1.2 适合的测定方式
       改善型课题组是指测定用品齐备，测定操作规范、到位，测定时间充足，即能够独力按时完成全部测定工作，既可以采取传统方式，也可以采取外包方式完成测定工作的课题组。改善型课题组之所以选择测定外包，是为了提高测定效率，从而发表更多、更高水平的研究论文，优质结题，在激烈的同行竞争中脱颖而出，实现课题经费可持续。在测定外包方式中，改善型课题组可以选择试剂盒方式，性价比最高；也可以选择代测方式，测定效率最高。
       刚需型课题组是指：缺乏测定用品，尤其是某种仪器设备，或者测定操作难以规范、到位，或者测定时间不足，即不能独力按时完成全部测定工作的课题组。刚需型课题组之所以选择测定外包，是因为无法独力顺利完成测定工作，而必须借助于公司的专业能力。在测定外包方式中，刚需型课题组必须选择代测方式，而不能选择试剂盒方式。
       当然，只要愿意投入足够的时间和经费，改善型和刚需型课题组都可以选择传统方式的。在测定外包出现之前，所有课题组就不得不自己独力完成全部测定工作，只是测定效率太低而已。
       课题组可以根据自身的测定条件、测定能力和测定时间以及意愿，选择适合于自己的测定方式。
2.2 靠谱的公司
       生化测定外包公司负责：（1）研发系列成套的生化测定技术，（2）提供高质量的试剂盒和代测服务，（3）为试剂盒用户提供预测定和正式测定的技术支持，（4）为代测用户提供免费预测定，（5）提供科学、合理的建议。
       靠谱的测定外包公司：（1）强大的专业能力，这是根本，否则用户找你干什么，用户怎么才能拿到“轻松、及时拿到可靠、真实、可用的测定数据”；（2）良好的诚信记录，这是保证，否则用户怎么敢找你，又怎么才能信任你的试剂盒和代测服务的质量；（3）巨大的失信代价，这是公司的自我约束，否则如何约束住失信冲动？
       骗单和造假的外包公司：（1）不了解生化测定基本规律，又想赚快钱；（2）没有投入大量时间和金钱研发生化测定技术，持续打造强大的专业能力；（3）只能不讲诚信，也不顾忌失信代价，通过虚假宣传、故意误导和诱之以利来骗取订单；（4）没有专业能力做好试剂盒和代测服务，解决各种技术问题，只能敷衍塞责，甚至造假；（5）心存侥幸，期待用户不会认真审核数据，企图蒙混过关，能骗几个是几个。常见的表现包括：（1）大包大揽，夸大测定外包的效果；（2）催促用户下单，不愿意与用户深入细致地沟通测定细节和技术问题；（3）经常花式促销，打折、送礼和发购物卡等。
       有些用户被骗单和被造假的原因：（1）随便，误以为哪家外包公司都一样，简单搜索或者经销商推荐后就随便选择了一家外包公司；（2）轻信，轻易就相信搜索引擎的竞价排名结果，外包公司的虚假宣传和故意误导；（3）贪图小利，贪图折扣、礼物和购物卡；（4）纵容，已经发现被骗单，却几句好话就轻易原谅了对方，甚至继续与对方合作。
       被骗单的后果：（1）轻则测定反复，不能及时拿到测定数据，不能优质结题和顺利毕业；（2）重则测定失败，拿不到测定数据，不能按时结题和毕业；（3）甚至拿到的是假数据，被造假，一旦被发现，将严重影响学术发展。
       2022年11月7日，科技部通报处理了4篇论文的8位第一/通讯作者：未审核第三方公司提交的实验数据，就据此发表了论文；取消5年内课题申报、立项、报奖和职称晋升资格。表面上看，是上述测定外包用户“被造假”，即测定外包公司提交了虚假数据，用户和审稿人都没有发现，而被读者发现了。本质上，是用户没有仔细甄别、慎重选择测定外包公司！
       祸福无门惟其自招。用户与其埋怨骗子横行，不如擦亮自己的眼睛，仔细甄别、慎重选择靠谱的测定外包公司，以免悔之莫及。
 
3 事在人为：课题组应尽的责任
 
       事在人为的“为”是指遵循该事的基本规律，厘清自身和合作方各自应尽的责任，即“自己愿意和必须为此做什么”，才能相互配合，做成该事，顺利实现各自目的。
       就生化测定外包而言，除了选择适合于自己的测定外包方式和靠谱的测定外包公司之外，为了保证测定外包顺利完成和测定数据可靠、真实、可用，课题组还必须尽到如下自己应尽的责任。
3.1 主动、尽早、全面咨询
       主动是指课题组应该充分认识到做好生化测定外包，自身才是获益最大的一方，否则就是损失最大的一方，必须主动咨询公司和所在单位。
       尽早是指“凡事预则立，不预则废”，课题组应该在研究设计时就咨询公司，最迟也得在准备样本前咨询公司，以免准备的样本质不可靠、数不合理和量不充足，导致后续测定失败。
       全面是指凡是影响生化测定外包顺利进行的因素，课题组都应该咨询：（1）咨询外包公司，包括如何选择测定指标、测定方法和测定方式，如何准备样本，测定外包的费用，试剂盒用户如何做好预测定，代测用户如何审核免费预测定结果，如何全面、正确地分析正式测定数据等；（2）咨询所在单位，包括最新的采购和报销政策以及报销截止日期等；（3）如果是研究生，还得咨询课题主持人/导师，寻求其同意和支持。
3.2 及时、如实、全面沟通
       在下单、预测定、正式测定和数据分析等阶段，课题组还必须及时、如实、全面地与公司沟通。否则，难以保证测定外包顺利进行，也不能保证测定数据可靠、真实和可用。
       下单时：确认订单，包括样本、测定指标、测定方法、测定方式、测定总费用、提交试剂盒的日期与详细地址、寄送样本的方式、提交免费预测定结果的日期和有效联系方式等。
       预测定：试剂盒用户及时、如实、全面与公司沟通预测定结果，对可疑结果进行分析，必要时寄回试剂盒和部分样本，由公司进行验证；代测用户及时、认真审核免费预测定结果，就可疑结果进行沟通和验证；课题组和公司双方确认无误后，再开始正式测定。只有找出预测定结果不好的真正原因，才能进行优化/调整。
       正式测定：按照课题组和公司双方确认的测定指标和测定方法，完成正式测定；试剂盒用户在正式测定中碰到异常时，马上暂停，与公司沟通、解决后，再继续测定。
       全面、正确分析测定数据：用户及时、全面、正确分析正式测定数据，以确保可靠、真实和可用；试剂盒用户即使正式测定顺利，也必须与公司沟通，等公司确认无误。避免使用未经课题组和公司双方确认无误的数据，撰写并发表研究论文，以免被造假。
3.3 及时报销，如实标注
3.3.1 及时报销
       为了方便用户和显示诚意，靠谱的生化测定外包公司一般实行“试剂盒先用后付”和“代测提供免费预测定”的销售政策。如果试剂盒或者代测服务质量不存在问题，用户就应该及时报销。
       不及时报销：（1）给课题组自己造成不必要的麻烦，如丢失发票、错过所在单位报销截止日期和影响结题财务决算等；（2）影响课题组的诚信记录，言而无信，不知其可也，没有人敢与你合作，成为课题组老师和研究生今后职业发展的阻碍；（3）给公司造成不必要的麻烦，己所不欲勿施于人，公司不能及时收回货款，就难以维持正常运转，就可能不再给予该用户先用后付的政策，拒绝再为该用户服务，甚至起诉该用户。
3.3.2 如实标注
       文责自负：在上述科技部通报处理的4篇论文的8位第一/通讯作者，正是因为在论文中如实标注了测定外包公司和测定外包方式，科技部才认为他们是被造假，所以处理就明显轻于主动造假的其它几篇论文的作者（编造数据、图片重复使用等）。
       如实标注测定外包公司和测定外包方式，不仅是杂志社的要求，也是对作者本身的保护。
       只有得到课题组和公司双方都确认无误的测定数据，才可以撰写并发表论文。否则，害己害人。
       能够读完本文，表明您是真心想做好生化测定外包。
 
       期待用户和经销商：遵循生化测定基本规律，与我司坦诚合作，轻松、及时拿到可靠、真实、可用的生化测定数据，用户优质结题、顺利毕业，经销商和我司可持续多赚钱。
 
       期待友商：遵循商业规则和生化测定基本规律，建设强大的专业能力，积累良好的诚信记录，形成巨大的失信代价；切勿骗单和造假，最终害人害己。